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胆碱在乳品中的应用和测定
朱云飞 / 2019-06-20

1关键词:胆碱、胆碱氧化酶、过氧化物酶、磷脂酶D
一、胆碱
胆碱是一种强有机碱,是卵磷脂的组成成分,也存在于神经鞘磷脂之中,是机体可变甲基的一个来源而作用于合成甲基的产物,同时又是乙酰胆碱的前体。
胆碱对人体的作用相当广泛,如促进脑发育和提高记忆能力、调控细胞凋亡、促进脂肪代谢、促进体内甲基代谢、降低血清胆固醇等。因此,在乳品中添加胆碱越来越受到重视,世界许多国家,包括中国在内,均已将胆碱批准作为营养食品添加剂。
国标GB5413.20-2013婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定中规定了两种方法,酶比色法和雷氏盐分光光度法。鉴于目前传统的检测方法(雷氏盐比色法)不同程度的存在操作繁琐、选择性差、干扰因素多等缺陷,一般大型企业都会选择酶比色法。
二、胆碱的含量测定方法(酶比色法)
1、原理:胆碱经酸水解后边成游离态的胆碱,再经酶氧化后与显色剂反应生成有色物质,其颜色的深浅在一定浓度范围内与胆碱含量成正比。
2、试剂
盐酸(1mol/L):量取85ml的浓盐酸加水稀释至1000ml;
盐酸(3mol/L):量取125ml的浓盐酸加水稀释至1000ml;
氢氧化钠溶液(500g/L):称取500g氢氧化钠,溶于水并稀释至1000ml;
Tris缓冲溶液(0.05mol/L,PH=8.0±0.2):称取6.057g三羟基氨基甲烷溶于500ml蒸馏水中,用1mol/L盐酸调PH至8.0±0.2,用蒸馏水定容至1000ml。此溶液在4℃冰箱可保存一个月;
酶反应显色剂:取100-120活力单位的胆碱氧化酶、250-280活力单位的过氧化物酶、75-100活力单位的磷脂酶D、15mg 4-氨基安替比林和50ml苯酚置于100ml的容量瓶中,用0.05mol/L Tris缓冲液稀释至刻度。(现用现配)
胆碱氢氧化物标准品:称取102±2℃烘至恒重的胆碱酒石酸氢盐523mg置于100ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度即为储备液(冰箱冷藏不超过1周);吸取储备液10.0ml溶液与100ml容量瓶中,用水稀释至刻度即为工作液(现用现配)。
3、简易步骤
3.1样品制备:称取5g混合均匀的固体样品(液体20g),于100ml锥形瓶中,加入30ml1mol/L盐酸溶液(液体样品10ml 3mol/L盐酸溶液);70℃水浴,水解3小时(每隔半小时摇匀一次),冷却,用氢氧化钠溶液调PH为3.5-4.0,转入50ml容量瓶中用蒸馏水定容;过滤水解液,滤液应是澄清,否则再虑,滤液放冰箱冷藏可保存3天。
3.2标曲制作:分别吸取2ml、4ml、6ml、8ml胆碱标准工作液于10ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度;准备6支试管,一个做空白加入0.1ml蒸馏水,另5支分别加入0.1ml标准溶液和4个稀释梯度,再每个试管加入3ml酶反应显色剂;用密封保护膜盖住试管,混匀,把试管置于37℃水浴中保温反应15min;时间到后将溶液取出冷却至室温,再波长505nm处,用蒸馏水做空白,测定吸光值制作标准曲线。
3.3样品测定:将每个样品准备2支试管,分别加入0.1ml样品滤液,一个加入蒸馏水3ml做空白,一个加入3ml酶反应显色剂;用密封保护膜盖住试管,混匀,把试管置于37℃水浴中保温反应15min;时间到后将溶液取出冷却至室温,再波长505nm处,用蒸馏水做空白,测定吸光值,然后计算样品中胆碱的含量。
三、酶比色法中源叶能为您提供的试剂
1、胆碱氧化酶:CAS号 9028-67-5  源叶货号S31014
2、过氧化物酶:CAS号 9003-99-0
源叶货号S10061、S10062、S10063、S10064(不同纯度的)
3、磷脂酶D : CAS号 9001-87-0 源叶货号 S25117、S31760
4、4-氨基安替比林: CAS号 83-07-8 源叶货号 B34212

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